EnglishJournal of Advanced Research（17.1）：单细胞与空间转录组揭示肾纤维化中的促纤维化巨噬细胞
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论文ID
原名：Integrated single-cell and spatial transcriptomic analyses identify a unique subset of pro-fibrotic macrophages in kidney fibrosis
译名：单细胞与空间转录组整合分析鉴定肾纤维化中特异的促纤维化巨噬细胞亚群
期刊：Journal of Advanced Research
影响因子：17.1
发表时间：2026.8.22
DOI号：10.1016/j.jare.2026.08.041
背 景
急性肾损伤（AKI）是以肾功能快速下降为特征的临床综合征，严重或反复发作后可进展为慢性肾病（CKD）。AKI后的不良修复包括持续炎症、成纤维细胞扩增和细胞外基质沉积，其中单核吞噬细胞（MNP）是连接组织损伤与纤维化的重要免疫群体。巨噬细胞具有明显的异质性和可塑性，不同亚群可分别参与炎症放大、损伤修复或纤维化，但传统的M1/M2分类难以解析AKI向CKD转变过程中的具体功能状态。单细胞RNA测序（scRNA-seq）能够区分细胞亚群及其转录程序，空间转录组（ST）则可显示这些细胞在肾组织中的定位及相互邻近关系。基于此，作者希望从时间和空间两个维度识别真正推动成纤维细胞活化的巨噬细胞亚群，并解析其介导肾纤维化的配体-受体及下游信号机制。
实验设计
结 果
01
单细胞图谱揭示肾缺血损伤后的细胞组成动态
作者首先在假手术及UIRI后12小时、1天、4天和10天采集小鼠肾组织，构建覆盖AKI、AKI向CKD转变及CKD阶段的scRNA-seq和ST时间序列（图1A）。质量控制后共获得135,280个细胞，依据Slc34a1、Epcam、Nphs1、Acta2、Ptprc和Egfl7等标志基因，将其划分为上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞和间充质细胞四大类（图1B-C）。细胞比例显示，上皮细胞占66.49%，但在损伤后逐步减少；免疫细胞占21.67%，并随病程扩张。进一步分析免疫细胞发现，中性粒细胞在损伤后1天达到高峰，随后下降，而MNP数量持续增加，在4天和10天最为明显，提示其与损伤后期的不良修复密切相关（图1D）。作者随后依据经典标志基因将全部细胞细分为近端小管、损伤近端小管、集合管细胞、髓袢细胞、足细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞、MNP、中性粒细胞、NK细胞和T细胞等20种类型（图1E-F）。时间变化显示，近端小管细胞在1天显著下降，后期出现部分恢复；MNP和中性粒细胞则呈现最强烈的动态波动（图1G）。分时间点UMAP进一步显示MNP在损伤修复过程中持续积累（图1H），由此确定MNP为后续解析AKI向CKD进展的核心细胞群。
图 1. 小鼠肾脏单细胞图谱及缺血损伤后的动态变化。
（A）scRNA-seq与空间转录组测序（ST-seq）的实验流程示意图。scRNA-seq使用UIRI后12小时和4天的肾脏样本，每个时间点3只小鼠；其余时间点每组2只小鼠。ST-seq每个时间点均设置3个生物学重复。（B）主要细胞群经典标志基因Slc34a1、Epcam、Nphs1、Acta2、Ptprc和Egfl7的特征表达图。（C）UMAP展示假手术组和UIRI组中上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞及间充质细胞的分布，右侧为各类细胞的相对比例。（D）柱状图展示不同时间点各类免疫细胞所占比例。（E）点图展示各细胞群特异性标志基因的表达模式，柱状图展示各细胞群的细胞数量；颜色表示细胞类型，点的颜色深浅表示平均表达量，点的大小表示表达该基因的细胞比例。（F）对135,280个细胞进行无监督聚类，共鉴定出20种细胞类型。PTS1/2/3表示近端小管三个节段，PT-Inj表示损伤近端小管，ICA和ICB分别表示集合管A型和B型细胞，PC表示集合管主细胞，CNT表示连接小管，EC表示内皮细胞，DCT表示远曲小管，TAL表示髓袢粗升支，DLH表示亨利袢降支，Podo表示足细胞，Fib表示成纤维细胞，vSMC表示血管平滑肌细胞，MNP表示单核吞噬细胞，Neu表示中性粒细胞，NK表示自然杀伤细胞。（G）柱状图展示20种细胞类型在各时间点的比例变化。（H）UMAP展示各时间点全部细胞类型的分布，虚线框标出MNP。
02
空间转录组显示MNP与成纤维细胞逐步共聚集
为明确MNP与纤维化效应细胞的空间关系，作者对5个时间点的肾组织进行ST分析，并将肾组织划分为皮质、髓质、乳头和肾小球区域。MNP标志基因Cd68和成纤维细胞标志基因Col3a1从假手术到UIRI后10天持续升高，其空间分布范围逐步扩大并出现明显重叠（图2A）。对15张Visium切片进行相关分析显示，Cd68与Col3a1表达呈显著正相关，说明免疫细胞浸润与成纤维细胞扩增在病程中同步增强（图2B）。作者进一步利用RCTD将scRNA-seq注释映射到空间转录组，重建20类细胞的组织分布，结果显示MNP和成纤维细胞的定位分别与Cd68和Col3a1信号一致，并在损伤后期共同向肾间质扩展（图2C）。定量分析显示，MNP在空间点位中的估计比例由假手术组的2.62%升至10天的17.47%，成纤维细胞则由0.21%升至33.28%（图2D-E）。双变量Moran指数进一步显示，两类细胞由早期相对随机分布逐渐转变为显著空间共聚集（图2F）。这些结果从组织尺度表明，随着AKI向CKD进展，MNP持续扩增并与成纤维细胞形成稳定的空间邻域，为二者之间的促纤维化通信提供了解剖基础。
图 2. 小鼠肾脏空间转录组图谱及缺血损伤后的动态变化。
（A）Cd68和Col3a1的空间特征表达图。（B）15个Visium空间转录组样本中Cd68与Col3a1表达水平的相关性散点图，不同颜色代表不同实验组；图中显示线性回归线及95%置信区间，相关性采用Spearman秩相关检验评估。（C）基于RCTD评分获得的成纤维细胞和MNP细胞类型解卷积图。（D-E）箱线图展示Visium空间位点中成纤维细胞和MNP的估算比例，n=3，采用双侧Welch t检验。（F）箱线图展示15个空间转录组样本中成纤维细胞与MNP的双变量Moran指数；分别将UIRI后12小时、1天、4天和10天与假手术组比较，n=3，采用双侧Welch t检验。所有箱线图的中央横线表示中位数，箱体上方横线标示组间比较的P值。
03
鉴定损伤诱导的促纤维化巨噬细胞亚群
作者从单细胞数据中提取13,625个MNP，进一步划分为抗原呈递巨噬细胞、趋化因子巨噬细胞、促纤维化巨噬细胞（PFM）、增殖型巨噬细胞、单核细胞和经典树突状细胞6个亚群（图3A-D）。其中PFM在正常肾脏中几乎缺失，仅占MNP的1.49%；UIRI后迅速升高，12小时和1天分别达到26.40%和43.33%，细胞数量在4天达到1,550个，随后在10天仍维持较高水平，呈现典型的损伤诱导和持续激活特征（图3B-C）。转录特征显示，PFM高表达Fn1、Arg1、Gpnmb和Fabp5，且显著富集细胞外基质-受体互作、黏着斑等纤维化相关通路；增殖型巨噬细胞则特异表达Mki67、Stmn1和Top2a，其他亚群也分别具有清晰的标志基因和功能模式（图3E-F）。Monocle拟时序分析将PFM定位于单核细胞向成熟巨噬细胞分化的中间阶段，CytoTRACE评分同样显示其分化潜能介于单核细胞、树突状细胞与成熟巨噬细胞之间，说明PFM是一种短暂的损伤激活状态（图3G-H）。流式细胞术进一步证实，UIRI后4天肾组织中CD206阳性、GPNMB阳性的巨噬细胞显著增加（图3I-J），从独立实验层面验证了PFM亚群在损伤肾脏中的真实存在。
图 3. MNP亚群的时空特征分析。
（A）质量控制后MNP亚群的UMAP图，不同颜色表示不同MNP亚型。（B）柱状图展示缺血损伤后不同时间点6种MNP亚型的比例。（C）UMAP展示假手术组及损伤后12小时、1天、4天和10天的MNP亚群分布。（D）特征图展示各MNP亚型中C1qa、Mrc1、Arg1、Gpnmb、Ccl8、Mki67、Ly6c2和Cd209a的表达。（E）展示上述6种MNP亚型前20个代表基因之间的关系，以及KEGG分析富集程度最高的5条相关通路。（F）PFM差异表达基因火山图，横轴表示表达细胞比例差异，纵轴表示log2倍数变化；标注的差异基因满足|log2倍数变化|≥1.5、|细胞比例差异|≥0.25且校正后P≤0.05。（G）Monocle拟时序轨迹树展示MNP亚群的拟时序排列。（H）Monocle轨迹树按照CytoTRACE预测的细胞分化潜能着色，左图颜色由红至蓝对应图中1.0（Less diff.）至0（High diff.），右图箱线图比较各MNP亚型的CytoTRACE分化潜能评分。（I-J）代表性流式细胞术图及定量结果展示UIRI后4天肾脏中CD206阳性、GPNMB阳性巨噬细胞的比例。
04
PFM通过THBS1-LRP1轴与成纤维细胞建立空间通信
空间解卷积显示，不同MNP亚群具有明显的区域偏好：趋化因子巨噬细胞主要分布于损伤后期的肾髓质，单核细胞在1天达到高峰并聚集于皮髓交界区，而PFM从1天开始扩张，在4天和10天大量积聚于皮髓交界区（图4A-B）。Misty分析显示，PFM在4天和10天与成纤维细胞具有最强空间重叠；双变量Moran指数由假手术组的0.16升至4天的0.46和10天的0.47，证明二者由随机分布转向稳定共聚集（图4C-D）。CellChat分析进一步显示，MNP与成纤维细胞之间的通信强度随病程持续增强，PFM-成纤维细胞互作在正常肾脏中几乎不可见，到4天和10天形成高强度连接（图4E）。配体-受体筛选鉴定出PFM特异表达的血小板反应蛋白1（THBS1，对应基因Thbs1），其与成纤维细胞的通信在4天和10天显著增强；候选受体中Cd47、Cd36和低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1，对应基因Lrp1）排名靠前，作者据此聚焦THBS1-LRP1轴（图4F-G）。分子对接预测THBS1与LRP1具有稳定结合界面和−9.6 kcal/mol结合自由能（图4H），双向免疫共沉淀证实两者形成蛋白复合物（图4I-J），表面等离子体共振检测到浓度依赖结合，亲和常数为5.28 μM（图4K-L）。这些结果建立了PFM来源THBS1直接结合成纤维细胞LRP1的分子通信轴。
图 4. MNP亚群与成纤维细胞的空间定位及细胞通信。
（A）基于RCTD对MNP亚群和成纤维细胞进行空间解卷积。（B）箱线图展示Visium空间位点中PFM的估算比例。（C）Misty热图展示PFM与其他细胞类型的共表达评分。（D）箱线图展示15个空间转录组样本中成纤维细胞与PFM的双变量Moran指数；分别将UIRI后12小时、1天、4天和10天与假手术组比较，n=3，采用双侧Welch t检验。箱线图中央横线表示中位数，箱体上方横线标示组间比较的P值。（E）CellChat展示MNP亚群与成纤维细胞之间的信号网络，连线权重和粗细表示互作数量。（F）点图展示不同巨噬细胞亚群可能分泌并作用于成纤维细胞的候选信号；点的大小表示基因表达水平，颜色表示配体-受体对的显著性。（G）Thbs1及其受体的互作网络，节点大小和颜色表示数据库中的参考文献数量。（H）分子对接预测THBS1-LRP1结合位点，并展示三维模型及具体接触残基。（I-J）免疫共沉淀证实THBS1可在NRK-49F细胞中与LRP1形成复合物。（K）表面等离子体共振分析LRP1与THBS1的结合。（L）LRP1浓度与THBS1响应值的相关性拟合。
05
THBS1与LRP1在纤维化肾间质中呈时空邻近分布
作者进一步追踪Thbs1和Lrp1在UIRI过程中的时空表达。Thbs1呈双相变化，损伤后12小时轻度升高，在4天再次强烈诱导，10天有所下降；Lrp1则随损伤进展持续增加。两者在AKI向CKD转变的4天阶段出现最明显的空间共富集，相关分析也显示Thbs1与Lrp1表达呈显著正相关（图5A-B）。蛋白检测证实，UIRI后10天肾组织中的THBS1和LRP1均显著升高（图5C-D），免疫组织化学显示两种蛋白主要分布在受损肾脏的间质区域（图5E），同时UIRI小鼠血浆THBS1浓度也明显增加（图5F）。双重免疫荧光进一步解析其细胞来源：THBS1主要与巨噬细胞标志物F4/80共定位，说明其主要由浸润巨噬细胞表达（图5G）；LRP1则与肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）共定位，证实其位于活化成纤维细胞（图5H）。THBS1和LRP1双染显示，THBS1阳性巨噬细胞紧邻LRP1阳性成纤维细胞，但两类信号并不重叠（图5I）。因此，转录组、蛋白表达和组织成像共同描绘了“PFM分泌THBS1—邻近成纤维细胞表达LRP1”的空间组织模式。
图 5. Thbs1与Lrp1的时空共表达及分子互作特征。
（A）假手术组及UIRI后不同时间点Thbs1和Lrp1的空间共表达模式；蓝色表示Thbs1，红色表示Lrp1，紫色表示Thbs1-Lrp1共同富集位点。紫色位点表示同时检测到两个基因的空间区域，混合阈值为0.5，颜色强度反映两基因表达量的几何平均值。（B）15个Visium空间转录组样本中Thbs1与Lrp1表达水平的相关性散点图，不同颜色表示不同组别；图中显示线性回归线及95%置信区间，相关性采用Spearman秩相关检验评估。（C-D）Western blot及灰度定量检测UIRI后10天小鼠肾脏中THBS1和LRP1的表达。（E）代表性显微图展示正常肾脏和UIRI后10天肾脏中THBS1与LRP1蛋白的表达和定位。（F）ELISA检测UIRI后10天小鼠血浆THBS1浓度，n=6，采用双侧独立样本t检验。（G）UIRI后10天肾脏中F4/80（绿色）与THBS1（红色）的共定位。（H）α-SMA（绿色）与LRP1（红色）的共定位。（I）LRP1（绿色）与THBS1（红色）的双重染色；比例尺为50 μm。
06
PFM来源THBS1依赖LRP1促进成纤维细胞活化和增殖
为验证THBS1的促纤维化功能，作者使用重组THBS1刺激NRK-49F肾间质成纤维细胞。THBS1处理后，纤维连接蛋白、胶原I、α-SMA、c-Myc、c-Fos和增殖细胞核抗原（PCNA）表达均明显升高，说明细胞外基质合成、肌成纤维细胞转化和增殖程序被同时激活（图6A-C）。免疫荧光进一步显示纤维连接蛋白沉积增加（图6D），EdU掺入实验则证实THBS1显著提高成纤维细胞增殖比例（图6E-F）。随后，作者利用siRNA敲低LRP1，发现LRP1磷酸化受到抑制，THBS1诱导的纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA上调几乎完全消失（图6G-I）；相应的纤维连接蛋白染色和EdU阳性细胞也明显减少（图6J-K）。使用受体相关蛋白（RAP）这一LRP家族配体竞争性拮抗剂处理后，THBS1同样无法继续诱导纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA表达（图6L-M）。从基质产生、细胞表型和增殖三个层面看，THBS1能够直接驱动肾间质成纤维细胞活化，而LRP1是传递这一促纤维化效应所必需的膜受体。
图 6. PFM来源的THBS1促进肾间质成纤维细胞活化和增殖。
（A-C）Western blot及灰度定量检测THBS1刺激后NRK-49F细胞中纤维连接蛋白、胶原I、α-SMA、c-Myc、c-Fos和PCNA的表达；与对照组相比，**P<0.01、***P<0.001，n=3，采用双侧独立样本t检验。（D）免疫荧光显示THBS1刺激后的纤维连接蛋白表达，比例尺为50 μm。（E）EdU实验检测THBS1对NRK-49F细胞增殖的影响，比例尺为50 μm。（F）EdU阳性NRK-49F细胞的定量结果；与对照组相比，**P<0.01，n=3，采用双侧独立样本t检验。（G-I）Western blot及灰度定量检测THBS1刺激并进行不同siRNA处理后，NRK-49F细胞中p-LRP1、LRP1、纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA的表达；与对照组相比，**P<0.01、***P<0.001。（J）代表性图像展示EdU标记的增殖细胞及纤维连接蛋白免疫染色，比例尺为50 μm。（K）EdU阳性NRK-49F细胞的定量结果。（L-M）Western blot及定量结果展示各处理组纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA的表达。
07
THBS1-LRP1并行激活FAK/AKT/ERK与TGF-β/Smad信号
机制研究显示，THBS1刺激NRK-49F细胞后迅速诱导黏着斑激酶（FAK）磷酸化，并同步激活其下游蛋白激酶B（AKT）和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2），表明THBS1可启动促进细胞生长和基质合成的级联信号（图7A-B）。加入LRP1拮抗剂RAP后，FAK、AKT和ERK1/2磷酸化均显著减弱，证明该通路的启动依赖THBS1与LRP1结合（图7C-D）。使用FAK抑制剂PF573228同样阻断三种蛋白的磷酸化，并抑制纤维连接蛋白、α-SMA和PCNA表达，说明FAK位于LRP1下游并负责传递成纤维细胞活化和增殖信号（图7E-G）。PFM的基因集富集结果与体外实验一致，显示黏着斑、AKT、ERK及转化生长因子-β（TGF-β）相关通路共同增强（图7H）。短时THBS1刺激还促进活性TGF-β1形成并诱导Smad2/3磷酸化；敲低LRP1后，TGF-β1活化及Smad2/3信号均被阻断（图7I-J）。FAK抑制剂则不影响THBS1诱导的TGF-β1活化（图7K-L），说明THBS1/LRP1同时启动两条并行机制：一条经FAK/AKT/ERK促进成纤维细胞活化和增殖，另一条独立于FAK促进TGF-β/Smad信号，从而共同放大肾纤维化反应。
图 7. THBS1通过激活FAK促进成纤维细胞活化和增殖。
（A-B）Western blot及灰度定量检测人重组THBS1刺激NRK-49F细胞不同时间后p-FAK、p-AKT和p-ERK1/2的表达；与对照组相比，*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001，n=3，采用双侧独立样本t检验。（C-D）在有或无RAP预处理条件下，THBS1刺激NRK-49F细胞2小时后p-FAK、p-AKT和p-ERK1/2的Western blot及灰度定量结果。（E-F）在有或无FAK抑制剂PF-573228条件下，THBS1刺激NRK-49F细胞2小时后p-FAK、p-AKT和p-ERK1/2的Western blot及灰度定量结果。（G）Western blot检测有或无PF-573228条件下，THBS1刺激NRK-49F细胞48小时后纤维连接蛋白、α-SMA和PCNA的表达。（H）PFM的基因集富集分析展示4条与FAK/ERK/AKT及TGF-β信号相关的通路；NES表示标准化富集分数，所有通路的名义P<0.05，校正后P值见图中标注。（I-J）Western blot及灰度定量检测人重组THBS1刺激NRK-49F细胞后TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3的表达。（K-L）Western blot及灰度定量检测有或无PF-573228条件下THBS1刺激NRK-49F细胞后的TGF-β1表达。
08
体内敲低LRP1改善肾功能并减轻肾纤维化
为在体内验证LRP1的作用，作者在UIRI后4天向小鼠静脉注射对照shRNA或LRP1-shRNA质粒，并在后续完成对侧肾切除和组织检测（图8A）。Western blot和免疫组织化学均显示，LRP1-shRNA显著降低损伤肾脏中的LRP1蛋白，证明干预有效（图8B-E）。肾功能检测显示，敲低LRP1后血清肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）明显下降，提示UIRI后的肾功能损害得到改善（图8F-G）。在组织和分子层面，LRP1抑制显著降低纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA表达，说明成纤维细胞活化与增殖同步减弱（图8H-I）。免疫组织化学进一步证实PCNA阳性增殖细胞和纤维连接蛋白沉积减少，Sirius red染色显示肾间质胶原沉积明显下降（图8J-L）。与此同时，LRP1敲低还抑制肾组织中FAK、AKT和ERK1/2的磷酸化，体内信号变化与细胞实验结果一致（图8M-N）。这些结果表明，阻断LRP1能够切断THBS1驱动的促纤维化信号，进而减少成纤维细胞增殖、细胞外基质沉积和肾功能损伤，验证了THBS1/LRP1轴在AKI向CKD进展中的功能作用。
图 8. 敲低LRP1抑制成纤维细胞增殖并减轻肾纤维化。
（A）实验流程示意图。采用短发夹RNA（shRNA）敲低LRP1，黑色箭头标示UIRI、质粒注射、单侧肾切除（UNx）和处死取材的时间；UIRI后11天收集肾组织。（B-C）Western blot及定量结果展示各组LRP1蛋白表达。（D-E）代表性显微图及半定量结果展示各组LRP1蛋白表达，比例尺为50 μm。（F-G）各组血清肌酐和血尿素氮水平。（H-I）Western blot及定量结果展示各组纤维连接蛋白、α-SMA、c-Fos和PCNA的表达。（J-L）代表性显微图及半定量结果展示UIRI后11天各组PCNA、纤维连接蛋白和胶原的表达，比例尺为50 μm。（M-N）Western blot及灰度定量检测各组p-FAK、p-AKT和p-ERK1/2的表达。
09
人CKD样本验证THBS1-LRP1轴及尿THBS1的预测价值
作者最后将小鼠机制发现延伸至人CKD。对公开人肾脏空间转录组重新分析发现，CKD组织中THBS1和LRP1表达均高于正常肾组织；THBS1空间分布与巨噬细胞标志物CD68一致，LRP1则与成纤维细胞标志物COL3A1相关，两者在肾间质形成高度相似的空间分布（图9A）。在人CKD肾活检中，正常邻近肾组织仅见少量THBS1和LRP1，而膜性肾病样本中两种蛋白均明显增加，且呈紧密相邻但不完全重叠的定位模式，与小鼠UIRI肾脏结果一致（图9B）。为评估临床标志物价值，研究进一步分析稳定CKD组178例和进展性CKD组144例的尿液数据非依赖采集蛋白质组（DIA）结果（图9C）。进展性CKD患者的尿THBS1水平显著升高（图9D）；在校正年龄、性别、估算肾小球滤过率、尿蛋白/肌酐比和尿白蛋白后，尿THBS1仍与CKD进展风险正相关，优势比为1.38。尿THBS1还与尿白蛋白和血清胱抑素C呈正相关（图9E-F）。整合动物、细胞与人样本证据，作者构建了PFM分泌THBS1、结合邻近成纤维细胞LRP1并激活促纤维化信号的机制模型（图9G），同时提出尿THBS1可作为反映CKD进展风险的潜在无创指标。
图 9. THBS1和LRP1在人CKD中表达升高并呈空间邻近分布。
（A）人CKD肾组织的空间转录组分析，展示正常对照和CKD患者肾组织切片的代表性苏木精-伊红染色图，以及CD68、THBS1、COL3A1和LRP1的空间表达模式。（B）代表性显微图展示CKD患者肾活检标本中LRP1（绿色）和THBS1（红色）的表达及定位，箭头指示阳性染色，比例尺为50 μm；对照组为肾细胞癌患者的癌旁非肿瘤肾组织。（C）稳定型CKD（sCKD）和进展型CKD（pCKD）队列尿液DIA蛋白质组分析示意图。（D）箱线图展示尿THBS1丰度，pCKD组（粉色，n=144）显著高于sCKD组（蓝色，n=178），采用Wilcoxon秩和检验。（E）尿THBS1与尿白蛋白的相关性散点图。（F）尿THBS1与血清胱抑素C的相关性散点图。（G）THBS1驱动肾纤维化的潜在机制和信号通路示意图。
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结 论
总之，该研究通过单细胞和空间转录组整合分析，鉴定出一种在肾缺血损伤后新出现并持续扩增的PFM亚群。该亚群聚集于皮髓交界区，并通过分泌THBS1与邻近成纤维细胞表面的LRP1结合，同时激活FAK/AKT/ERK和TGF-β/Smad信号，促进成纤维细胞增殖、肌成纤维细胞转化及细胞外基质沉积。体内敲低LRP1能够改善肾功能并减轻肾纤维化，人CKD组织和尿液蛋白质组也验证了THBS1/LRP1轴的临床相关性。该文章由细胞图谱出发，依次完成空间定位、配体-受体筛选、分子互作、功能机制、动物干预和人群验证，揭示了PFM驱动AKI向CKD进展的关键机制，并为肾纤维化的靶向干预和无创风险评估提供了新的研究方向。
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